[摘要] 目的 了解本地区念珠菌性包皮龟头炎的致病菌种及其对常见抗真菌药物的敏感性。 方法 分别采用科玛嘉念珠菌显色培养基、YBC鉴定卡和ROSCO纸片扩散法进行念珠菌培养、菌种鉴定及药敏试验。 结果 380例患者共培养出93株阳性标本(24.47%)，分离出白念珠菌81株（87.10%），非白念珠菌12株（12.90%）。93株念珠菌对制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和特比萘芬的敏感率分别为100%、95.70%、92.47%、67.74%、56.99%、45.16% 。结论 白念珠菌是本地区念珠菌性包皮龟头炎的主要致病菌种，分离菌株对制霉菌素敏感性最高，其次是酮康唑和氟康唑，特比萘芬最低。
　　[关键词] 念珠菌；包皮龟头炎；抗真菌药；敏感性

　　近年来，念珠菌性包皮龟头炎患者逐渐增多，性病门诊中，由于性伴侣感染传播和滥用抗生素等引起生殖器微生态环境的改变，抗真菌药物的广泛使用导致出现真菌的耐药现象，给临床治疗带来困难。为了解引起男性念珠菌性包皮龟头炎的致病菌种及临床耐药情况，我们对自包皮龟头炎患者分离的93株念珠菌进行菌种鉴定，并用ROSCO纸片扩散法检测念珠菌对6种常见抗真菌药物的敏感性，现将结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 临床资料 对2005年3月—2006年10月期间到我院性病科门诊就诊的380例包皮龟头炎患者的龟头和包皮部位进行标本采集。病例纳入标准：（1）患者有不同程度的龟头及包皮红斑、丘疹、分泌物、糜烂等，伴或不伴瘙痒症状。（2）龟头包皮患处取材直接镜检见假菌丝和（或）芽生孢子。（3）近半个月局部和系统未使用过抗真菌药物。93例念珠菌性包皮龟头炎患者年龄18-56岁，平均36.5岁，病程2天-4个月，平均28.5天。已婚53例，未婚40例，合并有包皮过长62例。
1.2 标本采集 用沾有生理盐水的无菌棉签反复转动擦拭龟头和包皮的炎症部位取标本，所得标本立即闭管送检并接种科玛嘉念珠菌显色培养基；同时取材直接涂片，用10%氢氧化钾溶液悬滴镜检，高倍镜下发现有假菌丝和（或）芽生孢子时，认定为致病性念珠菌。
1.3 主要试剂 科玛嘉念珠菌显色培养基购自郑州博赛生物技术研究所；改良沙氏平板培养基、YBC鉴定卡均为法国梅里埃公司产品；酵母样真菌药敏纸片及改良SHADOMY琼脂均来自丹麦ROSCO公司生产。
1.4 标准质控菌株 采用丹麦ROSCO 公司提供的白念珠菌ATCC64548和白念珠菌ATCC64550 。
1.5 菌种鉴定 白念珠菌通过科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定（根据生长菌落在显色培养基上呈绿色为白念珠菌），其他念珠菌通过转种改良沙氏平板培养基并纯化分离成单个菌落后接种YBC鉴定卡，由VITEK32全自动细菌鉴定药敏分析仪（法国梅里埃公司）鉴定。
1.6 药敏试验 使用丹麦ROSCO公司生产的抗真菌药敏纸片（每种纸片所含药物剂量分别为：特比萘芬30μg、伊曲康唑8μg、氟康唑15μg、制霉菌素50μg、咪康唑10μg和酮康唑15μg）及改良SHADOMY琼脂检测念珠菌对6种常见抗真菌药的敏感性。方法：从琼脂平皿取培养24小时的菌落均匀悬浮于 0.85%氯化钠溶液，制备成0.5麦氏浊度菌悬液，接种液浓度为5×10⁵CFU/ml。用无菌棉拭子沾菌液均匀涂于改良SHADOMY琼脂培养基上，放置平皿干燥15分钟后用无菌镊子将含药纸片紧贴于含菌平皿表面，置35℃温箱培养18~24小时，测量抑菌环，判读结果。药物敏感性判断标准：参考ROSCO公司提供的药敏试验标准，按抑菌圈的直径大小判定为敏感，中度敏感和耐药。伊曲康唑、制霉菌素：抑菌环直径≥15mm为敏感，10 -14mm为中度敏感，无抑菌圈为耐药；特比萘芬、咪康唑、酮康唑、氟康唑：≥20mm为敏感，12-19mm为中度敏感，≤11mm为耐药。
2 结果
2.1 包皮龟头炎患者念珠菌的培养结果：380例患者共培养出93株念珠菌（24.47%），分离出白念珠菌81株（87.10%）；非白念珠菌12株（12.90%）。见表1。

表1 93株念珠菌的鉴定结果

2.2 药敏测定结果：93株念珠菌对制霉菌素、酮康唑及氟康唑均有较高的敏感性，分别为100%、95.70%、92.47% 。 81株白念珠菌对制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、特比萘芬耐药菌株数分别为0、1、3、22、12、46株；12株非白念珠菌对制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、特比萘芬耐药菌株数分别为0、0、1、1、2、1株。见表2。

表2 93株念珠菌对6种抗真菌药物敏感情况 株（%）

反-N-3-(5′-溴阿魏酰基)-N′-苄基哌嗪 盐酸盐类似物体外清除羟自由基活性研究

林爱斌

[摘要] 目的：研究反-N-3-(5′-溴阿魏酰基)-N′-苄基哌嗪盐酸盐类似物(TBFP)在体外清除羟自由基(·OH)的活性。方法：采用邻二氮菲-Fe²⁺氧化法测定TBFP、阿魏酸(FA)、抗坏血酸(VC)在体外对Fenton反应产生·OH的清除能力，计算表观清除率(CL)。结果：L5的最大·OH表观清除率(CLmax)最大，L8的CLmax最小。结论：部分TBFP具有比FA、Vc更强的体外清除·OH活性，适合做进一步药理研究。
[关键词] 阿魏酸；溴；哌嗪；盐酸盐；羟自由基

　　FA属于酚类抗氧化剂，是当归、川芎、升麻、木贼等中药的活性成分^[1]，也可从米糠、小麦、甘蔗、玉米、甜菜^[2]等谷物提取获得。阿魏酸衍生物具有抗炎、抗脂质过氧化、清除羟自由基、抗肿瘤、降血糖、调节DNA损伤[1,3,4]等药理作用。邻二氮菲-Fe²⁺氧化法的实验原理是：Fenton反应产生的·OH将邻二氮菲-Fe²⁺氧化为邻二氮菲-Fe³⁺，使邻二氮菲-Fe²⁺在536nm的吸光度降低，体系中先加入·OH清除剂时，吸光度降低幅度变小，从而通过计算CL表达药物清除·OH的能力。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
　　Thermo Labsystems Multiskan Spectrum酶标仪（Labsystems公司，芬兰）；TBFP (汕头大学医学院化学教研室合成，通过MS、¹HNMR、IR结构鉴定，图 1,表1)；Vc（上海国药集团化学试剂有限公司，AR）；七水合硫酸亚铁（广州化学试剂厂，AR）；30％过氧化氢（上海凌峰化学试剂厂，AR）；其它试剂均为国产分析纯。

图1 TBFP的化学结构 Fig.1 Structure of TBFP 表 1 TBFP的物理性质与收率 Table 1 Physical character and yield of TBFP

1.2 TBFP体外清除·OH活性研究
　　采用邻二氮菲-Fe²⁺氧化法测定TBFP、FA、Vc在体外对Fenton反应所产生·OH的清除能力，其中FA、Vc作为阳性对照 ^[5,6]。TBFP、FA、Vc分别采用60%乙醇、乙醇、水作为溶剂。各药设6个浓度，按照表2的顺序与体积加样于1.5mlEP管中，全部试剂加完后离心6s,37±1℃水浴1h,吸取250ul反应终液，加至96孔板中，酶标仪上测定536nm吸光度。
表2 清除·OH活性操作步骤
Table 2 Procedure of hydroxyl radical scavenging activities

按照下式计算CL。

1.3 统计学处理
　　统计分析采用SPSS 16.0软件,运用SNK检验比较各药物CLmax间的差异，检验水准а=0.05。画线图采用Origin 7.5软件。
2 结果
　　TBFP、FA、Vc的CL随浓度变化的关系见图2，各药物CLmax的SNK检验数据见表3。可见L5的CLmax最大，L8的CLmax最小，不同等级各药物之间的CLmax差异有统计学意义(P≤0.05)，相同等级各药物之间的CLmax差异无统计学意义(P>0.05)。

图2 TBFP体外清除·OH活性 Fig.2 Hydroxyl radical scavenging activities in-vitro of TBFP 表3 TBFP CLmax 的SNK检验 Table 3 Student-Newman-Keuls test on CLmax of TBFP

3 讨论
1． 有报道温度对Fenton反应影响较大^[7]，故应保持一致的加样间隔时间，水浴1h要严格计时，设计药物参比组的作用是消除药物溶剂及颜色对测定结果的影响。FA可由价廉的米糠提取获得，部分TBFP具有比FA、Vc更强的体外清除·OH能力，适合做进一步药理研究。[作者单位：汕头市皮肤性病防治院]
参考文献：
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[2] Ou S,Luo Y,Xue F,et al.Seperation and purification of ferulic acid in alkaline-hy- drolysate from sugarcane bagasse by activated charcoal adsorption/anion macro- porous resin exchange chromatography[J].J Food Engin,2007,78 (4):1298-1304.
[3] Hazeldine ST,Polin L,Kushner J,et al.Synthesis and biological evaluation of some analogs of the antitumor agents,2-{4-[(7-chloro-2-quinoxalinyl)-oxy]phenoxy} propionic acid, and 2-{4-[(7-bromo-2-quinolinyl)-oxy]phenoxy}propionic acid[J]. Bioorg Med Chem,2005,13:1069–1081.
[4] Sudheer AR,Muthukumaran S,Kalpana C,et al.Protective effect of ferulic acid on nicotine-induced DNA damage and cellular changes in cultured rat peripheral blood lymphocytes:A comparison with N- acetyl-cysteine[J].Toxicology in Vitro, 2007,21(4):576–585.
[5] Wu WM,Long Y,Wang T,et al.Free radical scavenging and antioxidative activities of caffeic acid phenethyl ester (CAPE) and its related compounds in solution and membranes:A structure–activity insight[J].Food Chem,2007,105:107–115.
[6] Zhao G,Xiang Z,Ye T,et al.Antioxidant activities of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginseng[J].Food Chem,2006,99:767–774.
[7] Lee C,Yoon J.Temperature dependence of hydroxyl radical formation in the hv/ Fe³⁺/H2O2 and Fe²⁺/H2O2 systems[J].Chemosphere,2004,56:923–934.

盐酸特比萘芬凝胶的制备及临床疗效观察

张灼锐 蔡怿 李腾蛟

[摘要]目的：介绍盐酸特比萘芬凝胶的制备及临床疗效，为皮肤浅部真菌病的治疗提供一种安全有效的新制剂。方法：将特比萘芬溶于酒精后加入添加增溶剂的水溶性基质中，制成凝胶剂，同时临床与对照组进行疗效比较。结果：制剂质量稳定，对皮肤真菌的疗效确切。结论：此制剂临床疗效好，使用方便，能较好改善患者皮肤舒适感，可作为外用抗真菌药的新制剂，
[关键词] 盐酸特比萘芬 凝胶 制备 临床应用
　　盐酸特比萘芬为广谱抗真菌药，能高度选择性的抑制真菌麦角鲨烯环酶，破坏真菌膜结构，从而发挥抑制和杀灭真菌的作用^[2]，我院将其制成水溶性的凝胶，应用于临床，取得较好疗效，很好改善患者对一般乳膏型外用药的皮肤不适感。现报道如下：
1． 处方
　　卡波姆₂₁ 1.5g EDTA-2Na 0.1g 纯化水 35g 特比萘芬 1g 乙醇30ml PEG₄₀₀ 15g 丙二醇20g 吐温₈₀ 6g 卡松0.1ml 50％三乙醇胺2ml 共制成100g。
2． 制备方法
　　将盐酸特比萘芬加乙醇溶解后备用，另取EDTA-2Na加纯化水溶解后，把卡波姆加入浸泡6小时，使溶胀完全后将PEG₄₀₀，丙二醇，吐温₈₀，及卡松加入搅匀，然后加入50％三乙醇胺溶液，搅成凝胶状，最后将盐酸特比萘芬加乙醇溶液缓缓加入，边加边搅，均匀后即可分装。
3． 质量控制
3．1性状 本品为无色透明凝胶状。
3．2稳定性观察 按照中国药典附录凝胶剂项下
3．3定性鉴别 取本品适量，加甲醇制成每1ml含盐酸特比萘芬5mg的溶液，滤过，作为供试品液；另取盐酸特比萘芬对照品，加甲醇制成5mg/ml的溶液，作为对照品溶液，按照薄层色谱法（中国药典2005版二部附录VB）试验^[1]，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF-254薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－水－甲醇－甲酸（60：40：10：10：2）为展开剂，展开后晾干，置紫外灯下检视，供试品在于对照品色谱相同位置，可见相同颜色的主斑点。
4． 临床应用
4．1病例选择 122例患者均为我院门诊，症状和体征典型，真菌直接镜检阳性，诊断明确的体、股、手足、花斑癣等皮肤病患者，没有用过抗真菌药。按要求完成观察的病例109例。
4．2试验方法：采用随机分组法，将其分为凝胶组和乳膏组（经X²检验，在性别、年龄、病种等方面没有显著性差异），凝胶组使用本院自制的1％盐酸特比萘芬凝胶，乳膏组使用1％盐酸特比萘芬乳膏（天津中美史克药业有限公司），体股癣连续用药1周，每日2次涂患处；花斑癣、手足癣用药2周，每日2次涂患处。
4．3疗效标准 痊愈：症状及体征完全消退，痒感消失，真菌镜检阴性；显效：症状及体征明显好转，痒感明显减轻，真菌镜检阴性，或见少许破碎、变形的菌丝、孢子；好转：症状及体征好转，痒感减轻，真菌镜检阳性；无效：病程无变化或加重，痒感同前或加剧，真菌镜检阳性。上述痊愈与显效两项合计为总有效率。见下表。

注：与乳膏组比较X²检验，P均>0.05。

4．4结果：凝胶组痊愈率为82.35％，总有效率为94.12％；乳膏组痊愈率为73.17％，总有效率为95.12％。同时，在临床应用中，均未见不良反应。
6． 讨论：盐酸特比萘芬属于酯溶性药物，其水溶性较差，仅微溶于水；皮肤外用药一般都制成乳剂型软膏，但其涂展性及皮肤舒适感都较水溶性差。我院通过改进，将盐酸特比萘芬先溶于酒精后，再加入添加有增溶剂的水溶性基质，较好的解决了盐酸特比萘芬的溶解性问题，改善其涂展性及皮肤舒适感，。通过与乳剂型乳膏的临床比较发现，凝胶剂与乳膏剂的治疗有效率没有明显差异。通过临床观察发现，凝胶剂对各病种的治愈率比乳膏组较高，特别是手足癣更为明显（其治愈率达69.2％，对所有病种总治愈率82.3％均比乳膏组的50％和73.1％高）；并且凝胶剂对手足癣渗出性皮损有较好的收敛作用，症状和体征改善较快，同时擦药方便，局部洁净干爽，患者易于接受，因此该制剂可作为治疗皮肤浅部真菌的新剂型推广使用。[作者单位：汕头市皮肤性病防治院]

参考文献：
[1]中国药典 二部[S]2005、附录27
[2]马振友 皮肤科国家基本药物与新特药手册[M] 世界图书出版社 185

　　[摘要] 目的 了解本地区浅部真菌病病原酵母菌感染菌种的构成及其耐药性特点，为临床提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法 采用改良沙氏培养基对1354份临床标本进行酵母菌培养和菌株分离，用科玛嘉念珠菌显色培养基和YBC鉴定卡对所分离的酵母菌进行鉴定，用ROSCO纸片扩散法检测分离菌株对6种常见抗真菌药物的耐药性。结果 共分离10种219株酵母菌，甲真菌病检出率最高（43.80％）,其次是股癣（16.70％），体癣（13.00％），足癣（11.11％），手癣最低（9.40％）。其中白念珠菌占63.47％；近平滑念珠菌占17.81％；热带念珠菌占6.85％；季也蒙念珠菌占5.94％；无名念珠菌占2.28％，其他酵母菌占3.65％。219株酵母菌对特比萘芬（TBE）、伊曲康唑(ITC)、氟康唑(FLC)、制霉菌素(NYS)、咪康唑(MIC)和酮康唑(KTC)的敏感性分别为53.42％、87.21％、97.26％、100％、80.35％和100％，耐药性分别为20.55％、11.11％、2.28％、0.0、12.72％和0.0。结论 本地区浅部真菌病酵母菌感染菌谱以白念珠菌为主，其次是近平滑念珠菌和热带念珠菌，体外药敏显示对制霉菌素、酮康唑和氟康唑有很好的敏感性，对特比萘芬、伊曲康唑和咪康唑产生了较高的耐药性。
　　[关键词] 浅部真菌病；病原酵母菌；；药敏试验
　　近年来，随着大剂量广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用，导管插管的普遍开展，烧伤抢救、放射治疗、器官移植广泛进行，真菌病的发病率有逐年增加的趋势，而在致病真菌菌群中，酵母菌感染比例明显上升^[1]。在本地区的真菌致病菌谱中，酵母菌已占首位，红色毛癣菌居第二^[2]。为深入了解致病酵母菌在浅部真菌病中的构成比例及其药敏情况，我们对2005年1月至2006年8月间临床拟诊为浅部真菌病的1354例患者进行真菌直接镜检和培养，对216例直接镜检阳性，培养酵母菌阳性患者所分离的菌株进行鉴定和药敏试验，现将结果报告如下：
　　1.材料与方法
　　1.1 病例来源 2005年1月至2006年8月间到本院皮肤科门诊就诊并拟诊为浅部真菌病的1354例患者, 年龄0～74岁，平均年龄31.5岁。其中体癣500例，手癣117例，足癣153例，股癣479例，甲真菌病105例。酵母菌感染病例选择标准：患者有典型真菌感染症状；在检查前1周，皮损部位未使用任何抗真菌药物；患病部位皮屑或甲屑真菌直接镜检阳性，真菌培养酵母菌阳性。
　　1.2 标本采集 常规方法采集标本。所有标本一部分立即接种改良沙氏培养基，置25℃培养14d，另一部分标本制成10％KOH涂片，立即镜检。
　　1.3 培养基 改良沙氏培养基、科玛嘉念珠菌显色培养基、改良SHADOMY琼脂。
　　1.4 菌种鉴定 白念珠菌和热带念珠菌通过科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定，其他酵母菌通过转种改良沙氏平板培养基并纯分离成单个菌落后接种法国梅里埃公司生产的YBC鉴定卡，由VITEK32全自动细菌鉴定药敏分析仪鉴定。
　　1.5 药敏试验 用丹麦ROSCO公司生产的酵母真菌药敏片及改良SHADOMY琼脂检测体癣、股癣、手癣和足癣患者分离酵母菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、咪康唑和酮康唑等6种抗真菌药的敏感性和耐药性。对甲真菌病患者所分离酵母菌菌株仅检测特比萘芬、伊曲康唑和氟康唑的敏感性和耐药性。实验过程按试剂说明书进行操作和判断实验结果，每次试验同时用标准菌株ATCC64550和ATCC64548两株白念珠菌监测实验条件。
　　2．结果
　　2.1 浅部真菌病病原酵母菌的检测情况
　　1354例临床拟诊为浅部真菌病的患者中真菌直接镜检阳性，同时培养酵母菌阳性216例，酵母菌感染率15.95％。共分离酵母菌219株，其中65株来源于体癣患者，检出率13.00％（65/500）；80株来源于股癣患者，检出率16.70％（80/479）；11株来源于手癣患者，检出率9.40％（11/117）；17株来源于足癣患者，检出率11.11％（17/153）；46株来源于甲真菌病患者，检出率43.80％（46/105）。3例合并感染均来自甲真菌病患者，其中2例培养结果为白念珠菌合并热带念珠菌生长，1例为白念珠菌合并近平滑念珠菌生长。足癣患者分离出无名念珠菌、土生隐球菌、罗伦特隐球菌各1例。甲真菌病患者中另分离出无名念珠菌3例，土生隐球菌2例，光滑念珠菌、红酵母、丛生丝孢酵母各1例。
2.2 体癣、股癣、手癣和足癣患者分离菌株药敏情况
　　根据病例选择标准，体癣、股癣、手癣和足癣患者共分离酵母菌173株，其中白念珠菌129株，占74.57％；近平滑念珠菌25株，占14.45％；热带念珠菌8株，占4.62％；季也蒙念珠菌7株，占4.05％；其他酵母菌4株，占2.31％。173株酵母菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、咪康唑和酮康唑等6种常用抗真菌药的敏感性分别为49.71％、86.71％、99.42％、100％、80.35％和100％，耐药性分别为20.23％、10.98％、0.58％、0.0、12.72％和0.0。具体情况见表1。
表1 体癣、股癣、足癣和手癣患者分离菌株对6种抗真菌药物敏感试验结果

菌株名称	例数	特比奈芬			伊曲康唑			氟康唑			制霉菌素			咪康唑			酮康唑
		S	I	R	S	I	R	S	I	R	S	I	R	S	I	R	S	I	R
白念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 季也蒙念珠菌 无名念珠菌 土生隐球菌 罗伦特隐球菌 合计	129 25 8 7 2 1 1 173	54 25 0 4 2 0 1 86	48 0 2 2 0 0 0 52	27 0 6 1 0 1 0 35	111 25 6 6 1 0 1 150	2 0 2 0 0 0 0 4	16 0 0 1 1 1 0 19	128 25 8 7 2 1 1 172	0 0 0 0 0 0 0 0	1 0 0 0 0 0 0 1	129 25 8 7 2 1 1 173	0 0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0 0	111 22 0 4 1 0 1 139	2 3 2 3 1 1 0 12	16 0 6 0 0 0 0 22	129 25 8 7 2 1 1 173	0 0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0 0

注：S：敏感；I：中介；R：耐药。
表2 甲真菌病患者分离菌株对3种抗真菌药物敏感试验结果

菌株名称	例数	特比奈芬			伊曲康唑			氟康唑
		S	I	R	S	I	R	S	I	R
白念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 季也蒙念珠菌 无名念珠菌 土生隐球菌 罗伦特隐球菌 光滑念珠菌 红酵母 丛生丝孢酵母 合计	10 14 7 6 3 2 1 1 1 1 46	8 14 0 3 2 2 0 1 0 1 31	1 0 0 2 1 0 1 0 0 0 5	1 0 7 1 0 0 0 0 1 0 10	10 14 7 5 1 2 1 0 0 1 41	0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 1 2 0 0 1 1 0 5	9 14 7 4 2 2 1 1 0 1 41	0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1	1 0 0 1 1 0 0 0 1 0 4

注：S：敏感；I：中介；R：耐药。

2.3 甲真菌病患者分离菌株药敏情况
　　根据病例选择标准，甲真菌病患者共分离酵母菌46株，近平滑念珠菌占30.43％。居首位，其次为白念珠菌，占21.74％，热带念珠菌占15.22％，季也蒙念珠菌占13.04％，其他酵母菌占19.57％。近平滑念珠菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑的敏感性均为100％；白念珠菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑的敏感性分别为80％，100％和90％，有1菌株同时对特比萘芬和氟康唑发生耐药。热带念珠菌对特比萘芬全部产生耐药，而对伊曲康唑、氟康唑全部敏感；季也蒙念珠菌对特比萘芬、伊曲康唑和氟康唑的敏感性分别为50％，83.33％和66.67％，而耐药率均为16.67％。具体药敏情况详见表2。
　　3.讨论
　　由上可见，体癣、股癣、手癣、体癣和甲真菌病均可由酵母菌感染引起，而且感染的菌种已达10种。白念珠菌在体癣和股癣患者感染中仍占主导地位，这与以前认为酵母菌感染主要由白念珠菌感染引起的观点相符，但在足癣和甲真菌病患者中，酵母菌感染菌群的分布发生了较大变迁，非白念珠菌已占主导地位，其中近平滑念珠菌的感染率已超过白念珠菌，特别是甲真菌病患者表现得更为明显。在本地区浅部真菌病患者酵母菌感染菌谱中，白念珠菌仍占主导地位，其次为近平滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌。此结果与上海报道的浅部真菌病以白念珠菌和光滑念珠菌为主，而且两者构成比例接近存在明显差别^[3]，这可能与地区差异有关。调查结果表明，甲真菌病患者酵母菌感染比例明显高于其他浅部真菌病。由此可见，酵母菌感染在本地区甲真菌病的致病菌谱中占主导地位，此结果与王端礼^[4]报道的南方地区甲真菌病感染菌谱以酵母菌为主的观点相符。另外，国内报道深部真菌病酵母菌感染菌谱以白念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌为主，克柔念珠菌的分离率也不低[5-7]，而在本地区浅部真菌病酵母菌感染菌谱中，光滑念珠菌的检出率非常低，仅占1/219, 未分离到克柔念珠菌。由此可见，病种不同，标本来源部位不同,致病酵母菌的构成存在较大差异，浅部真菌病酵母菌感染菌谱与深部真菌病酵母菌感染菌谱存在明显差异,这一点应引起临床医生和微生物检验者高度重视。
　　氟康唑、伊曲康唑和特比奈芬是目前口服治疗深部真菌病、甲真菌病和头癣的主要抗真菌药物。由于浅部真菌病容易复发，因此临床上也常常将氟康唑、伊曲康唑和特比奈芬用于口服治疗顽固的浅部真菌病。随着抗真菌药物的广泛应用，酵母菌耐药菌株越来越多，目前已经成为真菌病治疗的一大难题。本文研究显示，制霉菌素和酮康唑对体股癣和手足癣患者酵母菌感染的敏感性达100％，未发现耐药菌株，而咪康唑的敏感性和耐药性分别为80.35％和12.72％。此结果可能与目前临床上极少用制霉菌素和酮康唑外用制剂，主要用咪康唑制剂外用治疗浅部真菌病有关。氟康唑对浅部真菌病酵母菌感染的敏感性达97.26％，耐药率为2.28％。伊曲康唑对浅部真菌病酵母菌感染的敏感性为87.21％，耐药率为11.11％。特比奈芬对所有分离酵母菌的敏感性和耐药性分别为53.42％和20.55％。此结果说明，浅部真菌病酵母菌感染的外用治疗应首选制霉菌素或酮康唑制剂。刘雨村^[8]报道用制霉菌素甘油溶液预防和治疗口腔真菌感染的方法，因成本低，效果好，值得临床借鉴。由于制霉菌素和酮康唑系统治疗副作用较大，所以系统治疗应以氟康唑和伊曲康唑为主，但伊曲康唑已存在较高的耐药率，应引起临床高度重视。
　　白念珠菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、咪康唑和酮康唑的敏感性分别为44.60％、87.05％、98.56％、100％、86.05％和100％，耐药性分别为20.14％、11.51％、1.43％、0.0、12.40％和0.0，此结果与刘华^[9]报告的结果比较，明显偏低，可能是菌株来源部位及地区差异有关。近平滑念珠菌对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素和酮康唑的敏感性均为100％，对咪康唑敏感性为88.0％，中度敏感为12.0％，未发现耐药菌株。热带念珠菌对特比萘芬和咪康唑表现出高度耐药性，分别为86.67％和75.0％，但对伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素和酮康唑仍表现出高度敏感性，未发现耐药菌株，这与温旺荣^[10]报告的酮康唑对热带念珠菌感染疗效不佳存在明显差异，这可能与菌株来源部位不同有关。季也蒙念珠菌对制霉菌素和酮康唑表现出高度敏感性，未发现耐药和中度敏感菌株，对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑和咪康唑的敏感性分别为53.85％、84.62％、92.31％和57.14％，耐药性分别为15.38％、15.38％、7.69％和0.0。不同酵母菌药敏结果表明：①不同酵母菌对抗真菌药的敏感性不同，近平滑念珠菌对常见抗真菌药物均表现出较好的敏感性；②大多数酵母菌对特比萘芬均存在较高耐药性；③白念珠菌和季也蒙念珠菌对伊曲康唑存在较高的耐药性；④氟康唑对大多数酵母菌均表现出高度敏感性。
　　综上所述，本地区浅部真菌病酵母菌感染菌谱以白念珠菌和近平滑念珠菌为主，对特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、咪康唑和酮康唑的敏感性分别为53.42％、87.21％、97.26％、100％、80.35％和100％，耐药性分别为20.55％、11.11％、2.28％、0.0％、12.72％和0.0％。外用治疗以制霉菌素和酮康唑最佳，系统治疗最好选用氟康唑和伊曲康唑，但伊曲康唑已存在较高的耐药率，应引起临床高度重视。[作者单位：1.汕头市皮肤性病防治院；2. 汕头大学医学院第一附属医院]

参考文献：
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[8] 刘雨村，张洪英，刘丽萍，等. 制霉菌素甘油预防口腔真菌感染的临床观察. 中华医院感染学杂志 2004，14（ 6）：646-647
[9] 刘华，周中华，喻华，等. 260株念珠菌分离鉴定及耐药性分析. 中华医院感染学杂志，2004，14( 3)：347-349
[10] 温旺荣, 戴庚孙. 念珠菌耐药性的研究进展. 国外医学临床生物化学与检验学分册，2001，22（1）：38-39 [10]

117例系统性红斑狼疮患者 ANA、抗ENA抗体、抗dsDNA抗体检测

方小娴

　　　　　　　　 　 　　 　 　　 　 　　 　　

　　［摘要］　目的　探讨ANA、抗dsDNA、抗ＥＮＡ多肽抗体谱联合检测在ＳＬＥ的诊断中应用。方法　ANA、抗ds-DNA采用间接免疫荧光法；抗ENA多肽抗体采用免疫印迹法。结果　１１７例病人中ANA８４例，阳性率为71．8%、抗dsDNA 22例，阳性率为１８．８%、抗Ｓm２６例，阳性率为２２．２％、抗ＳＳＡ７２例，占６１．５％。结论　ANA、抗ENA、抗ds-DNA的联合检测可避免因单项检测而出现的漏诊情况，在ＳＬＥ的诊断中具有互补性，有利于提高SLE的检出率。
关键词：系统性红斑狼疮；ANA；抗ENA；抗ds-DNA
　　系统性红斑狼疮（SLE）是一种较常见的累及多器官的自身免疫性疾病，其发病机制主要是由于机体细胞和体液免疫功能紊乱，产生多种自身抗体从而形成免疫复合物，继而引发组织器官的损害，患者血清中自身抗体的检测是SLE实验诊断的主要指标，本文对117例患者进行了ANA、抗ENA、抗ds-DNA的检测，并对检测结果及其临床意义进行了分析和探讨，现将结果报告如下：
1． 资料与方法
１．１．１　临床资料 117例SLE患者均来自我院２００３年７月—２００７年１０月住院及门诊病人，其中男８例，占６．８%，女１０９例，占９３．２%，男女比例1：13．4，年龄１３－５６岁，平均３２岁，患者均符合美国风湿协会（ANA，１９８２年）修订的ＳＬＥ诊断标准，同期选４０名门诊健康患者为对照，，静脉采血，血清冻存备用。
１．１．２　方法和材料 ANA采用间接免疫荧光法，以HEP-2细胞(人喉癌上皮细胞)为抗原基质片，荧光显微镜下HEP-2细胞核或浆位置出现特异性亮绿色荧光染色为ANA阳性，，血清稀释＞１：４０有临床意义，同时做阴、阳性对照，底片由北京协和医院检验科荧光免疫室提供。荧沟显微镜为日本OLYMPUS公司生产。
１．１．３　抗dsDNA抗体采用马疫锥虫法（TE-IIF），以TE核及动基体发出亮绿色特异性荧光为阳性，同时做阴、阳性对照，底片由北京协和医院检验科荧光免疫室提供。
１．１．４　抗ENA多肽抗体谱检测采用免疫印迹法，试剂由欧蒙（德国）医学实验诊断有限公司提供。
２．结果 自身抗体检测结果见表1

表1 SLE患者和正常对照组ANA、抗dsDNA，抗ENA多肽抗体谱检测结果

3．讨论　系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病，多性发于15－40岁女性，常侵犯机体多个组织器官，是一种危害较大且难治的顽固性疾病，我们检测117例系统性红斑狼疮患者，其中ANA阳性８４例，阳性率为71．8%，与国内外报道的基本一致，但抗核抗体检测缺乏特异性，可见于多种结缔病，如SLE、硬皮病、干燥综合症、类风湿性关节炎等，少数正常人也可呈阳性反应（本次对照组２例阳性，占５％，滴度均很低），故ＡＮＡ一般多作为筛查试验。抗dsDNA在１１７例病人中检出22例，阳性率为１８．８%，抗dsDNA是SLE特异和致病性抗体，几乎存在于所有患者的血清中，与临床表现密切相关^[4]，它是SLE活动期的标志，但检测结果只占１８．８％，其原因可能是患者血清中过多的游离的ＤＮＡ抗原与相应的ＤＮＡ抗体结合所致，因此dsDNA结果阴性，不能排除SLE的诊断^[5]。抗ＥＮＡ多肽抗体谱检测包括７种抗体，其中抗ＳＳＡ阳性率较高，占６１．５％，略低于刘红斌检测的结果^[1]，高于王国丽的检测结果^[6]，有报道认为ＡＮＡ阴性ＳＬＥ患者抗　　ＳＳＡ检出率显著高于ＡＮＡ阳性患者^[7]，故在ＡＮＡ阴性时，如临床症状符合，需考虑进一步检查抗ＥＮＡ多肽抗体谱，防止漏诊。抗nRNP的阳性率为４１．０％，抗 nRNP抗体在混合结缔组织病中几乎阳性且具有较高的滴度，有人认为抗nRNP抗体阳性的ＳＬＥ病人如同时存在抗dsDNA抗体、抗Ｓm抗体，则发生狼疮性肾炎的可能性较大，病情较重，预后较差。抗ＳＭ的阳性率为２２．２％，一般认为抗Ｓm抗体是ＳＬＥ的标记性抗体，但其阳性率较底，目前未发现其与ＳＬＥ的病情活动及狼疮性肾炎有明确的关联。总之，SLE临床表现多样，血清中不但出现特异性的抗dsDNA、抗Ｓm抗体，也可出现大量的其它自身抗体，如抗ＳＳＡ、抗nRNP等，由于实验方法的不同、检测试剂的不同、质量控制的差异以及不同的检测人群和病人活动程度，自身抗体检测的敏感性和特异性可能有差异，因此不能以某一次某一项检测结果来诊断疾病，ANA、ENA、抗dsDNA的联合检测可避免因单项检测而出现的漏诊情况，在ＳＬＥ的诊断中具有互补性，有利于提高SLE的检出率。[作者单位：汕头市皮肤性病防治院]

参考文献
[1] 刘红斌 罗冰 张健愉．ＥＮＡ、抗dsDSDNA、ＡＮＡ测定在系统性红斑狼疮诊断中的价值［Ｊ］．中国医师杂志．2004，23(11)：1418
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LightSheer半导体激光脱毛的临床探讨

林涛 詹海燕

　　　　　　　　 　 　　 　 　　 　 　　 　　

　　激光脱毛的原理是基于选择性光热作用理论。毛囊和毛干中有丰富的黑素细胞，黑素细胞分布于毛球基质之间，并且能向毛干转移。激光能以黑素细胞为靶目标而选择性的进行脱毛治疗。黑素细胞吸收激光能量后，温度急剧升高，从而导致周围毛囊组织的破坏，起到脱毛作用，而没有毛发的地方由于缺少毛囊，吸收热少基本不受损伤。根据此原理，只要选择合适的波长、脉宽和能量密度，就能精确的破坏毛囊而基本不引起周围组织的损伤。
　　目前国内外研究证明激光的波长在695－1064nm之间为黑素细胞的最佳吸收波长，由于毛囊的热弛豫时间为40－100ms，因此理想的激光脉宽应该在40－100ms之间。LigheSheer半导体激光脱毛仪波长为810nm，光斑面积为9mm×9mm或12mm×12mm，脉宽为30ms、100ms和自动设置三种，频率为0.5－2Hz，配有Chilltip自动冷却系统，是目前临床应用于脱毛的最理想仪器之一。
　　根据我院对85例脱毛患者的治疗，基本取得了理想的效果。治疗前先将患者毛发刮除后消毒，治疗中激光手柄一般紧贴皮肤，光斑重叠小于10％，脉宽一般采用100ms左右，根据肤色深浅选择。能量选择20－40J／cm²，光斑直径9mm×9mm，以治疗后患者有轻度烧灼感，治疗部位轻度发红，数分钟后毛囊周围出现轻度水肿（用冰袋冰冻后30分钟至1小时消退）为度，术后可涂适量红霉素软膏。治疗次数为3－5次，间隔时间为2－3个月，每次治疗后毛发密度均出现不同程度下降，毛发变细变短，颜色变浅。经过规律疗程治疗后患者均得到永久性的毛发脱减，基本达到了治疗效果，术后约2％的患者出现色素沉着，一般可在2－6个月内消退。
　　半导体激光脱毛的适应证为所有部位的深色或浅色的毛发，但对白色毛发无效。禁忌证为：1有疤痕疙瘩病史。2在六周内有用过其它方式脱毛者。3治疗区有现症感染。4六个月内有使用过Lsotretnoin（13-顺维A酸）。
　　在治疗总结中发现，治疗的效果与毛发的粗细、颜色，特别是毛发的生长周期密切相关。一般较粗较黑的毛发治疗效果较好，而较细较浅的毛发治疗效果较差，总体来说男的治疗效果也较女的为好。毛发的生长周期更加是和治疗效果密切相关：（1）激光对退行期和静止期无明显作用，对生长期毛发作用明显，所以激光脱毛要多次治疗才能有明显效果。（2）如治疗部位的毛发处于生长期的比例小，则治疗次数增多，反之可减少。（3）不同的毛发有不同的生长周期，所以每次治疗间隔也有差异。如头部毛发治疗间隔为1－2个月，四肢和躯干一般为2－3个月。此外，针对不同的毛囊密度选择激光的治疗能量密度也对疗效有影响，越密的毛发治疗能量密度应相对越小，反之也然。
　　总的来说，目前半导体激光脱毛并不能一次就能摧毁所有毛囊，而是一种有时间性，有限性，有选择性的破坏。通过规律，多次的治疗能使患者得到永久性的毛发脱减，获得比较满意的疗效。[作者单位：汕头市皮肤性病防治院]

美能注射液治疗泛发性湿疹36例临床观察

李瑾娴 陈建宁

　　　　　　　　 　 　　 　 　　 　 　　 　　

　　我科于2007年1月～2007年10月应用美能注射液治疗泛发性湿疹36例，取得满意疗效，报道如下。
　　临床资料 78例泛发性湿疹均来源于我院住院部病人，年龄18～80岁，平均年龄47岁，其中男45例，女33例；病程1周～43年，多1～6年；受累面积大于体表面积5％，均符合泛发性湿疹诊断标准。所有患者治疗前1月内未应用长效糖皮质激素，1周内未服用抗组织胺类药物；无严重心、肺、肾、胃等器官及系统性疾病，无醛固酮症、低钾血症；既往均用过不同种类抗组织胺药物及糖皮质激素药物，治疗均不理想者（不含妊娠或哺乳期妇女）。
治疗方法：患者随机分成治疗组及对照组。治疗组36例用美能注射液（复方甘草酸苷，Stronger Neo-Minophagen C，SNMC，日本米诺发源制药株式会社生产）60ml/d加入5％葡萄糖注射液200ml中静滴；对照组42例给予甲泼尼龙片30mg/d口服，两组均同时给予口服地氯雷他定片5mg，qd，外用本院自配醋酸曲安奈德霜bid，渗出明显的患者加用3％硼酸湿敷。第3周分别将美能改为40mg/d，甲泼尼龙片20mg/d，共治疗3周。
　　疗效判定标准：治愈为临床症状消失，原发皮疹消退，无新发皮疹；显效为症状消失，皮疹消退≥70%；好转为症状明显缓解，皮疹消退≥30；无效为症状改善不明显，皮疹消退〈30％。治愈、显效、好转合并计算总有效率。治疗的患者于停药2周后又出现新发皮疹计为复发。
结果 两组疗效比较见表1。
表1 治疗3周两组疗效比较 例（％）

组别	例数	治愈	显效	好转	无效	总有效率（％）
治疗组	36	11（30.5）	13（36.1）	10（27.8）	2（5.6）	94．4
对照组	42	18（28.6）	14（33.3）	16（38.1）	4（9.5）	90．5

　　不良反应：治疗组1例出现下肢略肿胀，停药后肿胀消退，未影响治疗。对照组5例出现血糖升高。
　　复发率：停药2周时治疗组2例复发，对照组7例复发。
　　讨论 泛发性湿疹以其皮损多样，发生部位广泛，迁延不愈，给患者带来极大痛苦。湿疹的发病机制以Ⅳ型变态反应为主1。由于湿疹的变应原复杂且难以去除，多种抗组织胺药均不能达到满意疗效，而使用糖皮质激素虽有效，但全身应用会引起诸多副作用，且停药后常出现皮损恶化即所谓“反跳现象”。
　　美能注射液其主要成分为β体甘草酸苷、甘氨酸及半胱氨酸，药理作用有抗炎抗变态反应作用，它是通过抑制磷脂酶（phospholipase）A2的活性，阻断花生四烯酸（arachidonic acid）在起始阶段的代谢水平，并对补体经典途径有很强的抑制作用而具有抗补体活性²；有细胞膜的稳定作用；有抑制Arthus和Schwartzman现象的作用。因此，美能可以解决湿疹的炎症反应及变态反应问题。美能还有免疫调节作用，T细胞活化作用，诱发干扰素的作用，自然杀伤细胞的活化作用，这对湿疹慢性或顽固性过程中的免疫调节亦有一定的辅助疗效。
　　美能有增强氢化可的松的作用（类固醇样协同作用），美能对人体的类固醇激素代谢酶：11β－羟甾醇脱氢酶（11β－HSD）有强的抑制作用，从而减缓了类固醇的代谢速度，使内源性类固醇含量增加，作用增强，这种类固醇协同作用在湿疹治疗中有较好的帮助，能进一步减轻局部炎症反应、渗出、角化（甚至纤维化），而美能本身不是类固醇，所以引起的伪醛固酮副作用很少，半胱氨酸和甘氨酸具有抗变态反应和解毒作用。对一些需要较长时间应用类固醇的患者，这种协同作用对于减少其副作用是有意义的。
　　通过本临床观察结果，可以看出美能与小剂量糖皮质激素治疗泛发性湿疹具有相似的疗效，副反应轻微且经过药物减量或停药后，症状消失，值得临床参考应用。[作者单位：汕头市皮肤性病防治院]

参考文献
1． 赵辩.临床皮肤病学.第3版.南京：江苏科学技术出版社，2001.604.
2． 刘平，陈喜明，王冬云.甘草酸二铵治疗寻常型银屑病及湿疹皮炎的疗效观察.中国皮肤性病学杂志 2003；2：15－16.