[本刊消息]为进一步做好专科医师的自律、维权、管理、服务工作。经广东省医师协会第9次会长办公会议同意，广东省医师协会皮肤科医师工作委员会于5月25日在广州成立。广东省医师协会王智琼会长出席会议并讲话。
　　广东省医师协会皮肤科医师工作委员会的组成：名誉主委曾凡钦，主任委员李其林；副主任委员赖维、曾杭、陈永峰、邓列华、张锡宝、陈达灿；聘任顾问：许德清、禤国维、顾有守、佟菊贞、吴志华、林泽、徐广坤、候显曾；我市王建中（皮肤医院）聘任为常务委员，王俐（汕头大学附一院）、曾跃斌(汕头大学附二院）聘任为委员。

广东省医师协会 专科医师工作委员会职责

　　一、团结和组织专科医师遵守国家宪法，贯彻执行《中华人民共和国执业医师法》等法律、法规，弘扬以人为本、救死扶伤人道主义职业道德，依法行医，执业为民。
　　二、加强专科医师队伍的自律建设。协助卫生行政部门制定专科医师诊疗行为规范，忠于职守，爱岗敬业，树立医师的良好形象。
　　三、反映专科医师的呼声，依法维护专科医师的合法权益。在医师合法权益受到侵犯时，提供法律咨询与支持。主动加强与新闻媒体、社会各界沟通与合作，营造和谐的医患关系和良好的医疗环境。
　　四、开展继续医学教育，不断提高专科医师临床技能和医疗服务质量。
　　五、加强境内外医师组织间联系与合作，大力推广应用医学新知识、新理论、新方法、新技术，以加速专科医师队伍的发展。
　　六、协助卫生行政部门做好临床医师规范化培训，制定专科医师《培训大纲》、《培训细则》和准入、考核指标体系并予实施。
　　七、向有关部门提出专科建设与发展的意见与建议。
　　八、承接有关部门委托或交办的工作。评选、推荐成绩突出的优秀医师。

省卫生行业学会（协会） 发表《共建广东和谐医患关系宣言》

　　广东省医学会、广东省医院协会、广东省医师协会、广东省中医药学会共同发起了共建和谐医患关系宣言，提出了共建广东和谐医患关系，从我们学（协）会做起，从我们会员做起，从我们医务人员做起，从我们医院做起！

广东省医学会、广东省医院协会、广东省医师协会、广东省中医药学会

共建广东和谐医患关系宣言

　　和谐，人与人、人与社会、人与自然的和谐，是人类社会美好的、共同的追求，是时代的最强音，是构建富裕、公平、活力、安康社会的必要条件。医患和谐是和谐社会的重要组成部分，是医患双方共同的心声和祈求。
　　人的生命只有一次，生命无价、健康至上。医务人员是人类生命和健康的守护神，人道博爱是我们的灵魂。救死扶伤、治病救人是社会赋予我们的义务与神圣的职责。
　　我们庄严承诺：共建和谐医患关系，从我们（协）会做起！从我们会员做起！从我们医务人员做起！从我们医院做起！
　　我们爱国守法，诚信知礼，依法行医，以人为本，全心全意为人民服务；
我们关心病人，对病人一视同仁，不因患者的种族、地域、出身、宗教、年龄、性别、职业、贫富的不同而有所不同；
　　我们尊重患者的人格权、隐私权、知情权、选择权；
　　我们精益求精，努力探索医学新领域，不断提高医学技能，提升服务水平；
　　我们恪尽职守，团结合作，乐于奉献，廉洁行医，合理施治，促进医疗资源的科学利用；
我们严格行业自律，崇尚职业道德，坚守执业准则，自尊自爱，自警自励，用我们的医德医术，赢得社会的尊重，用我们的诚实守信，赢得社会的信任。
　　共建和谐医患关系需要全社会的共同参与。人格尊严与平等、信任与理解是和谐医患关系的基础。医学存在许多未知领域，医疗是高风险的职业，患者和医务人员只有互相理解、互相尊重、增进共识，营造和谐环境，才能更好的战胜疾病！
　　一切为了健康，一切为了病人，是我们矢志不移的信条。我们将以高度的使命感和责任感，以对国家、对人民、对社会负责的精神，忠实地投身于神圣的卫生事业，为共建和谐的医患关系、建设和谐社会而努力奋斗！

〔来源：《卫生行风建设简报》第71期〕

男性非淋菌性尿道炎患者尿道念珠菌 的检测及临床特点分析

　　　　　　　　　　　　　　　　许良杰 许敏鸿 陈昌鹏 黄进波

　　[摘要] 目的 了解男性非淋菌性尿道炎（NGU）患者的念珠菌感染情况。 方法 对198例男性NGU患者及65例正常对照的尿道分泌物标本进行念珠菌培养。 结果 198例NGU患者尿道分泌物标本中18例培养出念珠菌，阳性率为9.09%，65例正常对照组中，1例培养出念珠菌，阳性率为1.54%，两组比较，差异有显著性（P<0.05）。结论 男性NGU患者中部分可检测到念珠菌感染，念珠菌感染可能是男性NGU的一个致病因子，并分析了18例阳性患者的临床特点。
　　[关键词] 非淋菌性尿道炎； 念珠菌； 感染

　　非淋菌性尿道炎（NGU）患者近几年来逐年增加，除沙眼衣原体、支原体为常见病因外，也有10%-20%是由滴虫、念珠菌感染所致[1]。为了解NGU人群中念珠菌感染状况，我们于2004年10月-2006年2月，对性病门诊198例男性NGU患者的尿道分泌物进行念珠菌检测，并设立65例健康男性作为对照组，现将结果报告如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 临床资料 198例男性NGU患者均来自我院性病门诊，年龄20-53岁，平均年龄31.5岁，病程1月-2年，平均3.2月。所有患者均有非婚性接触史，就诊时有尿频、尿急和尿痛等尿道刺激征之一和（或）尿道有分泌物等尿道炎症状，尿道分泌物革兰染色涂片镜检和淋菌培养均为阴性且在接受检测前1周未系统使用抗真菌药物。对照组为健康男性65例，年龄22-50岁，平均年龄33.5岁。
　　1.2 方法
　　1.2.1 标本采集 先消毒患者尿道口，再用无菌一次性棉拭子插入尿道口内2~3cm，旋转2圈，停顿5秒后取出，立即放入无菌干燥试管送检作念珠菌培养。
　　1.2.2检测方法 念珠菌培养采用改良沙氏氯霉素培养基[2]，在25℃温箱中孵育，使用芽管形成实验及玉米粉吐温80琼脂顶端厚壁孢子试验鉴定白念珠菌。对芽管试验及玉米粉吐温80琼脂顶端厚壁孢子试验阴性的菌珠使用科玛嘉显色培养基并同时接种YBC卡，在VITEK32全自动细菌鉴定、药敏分析仪（法国梅里埃公司）上进行鉴定。
　　1.2.3 统计学方法 所得数据采用卡方检验进行处理。
　　2 结果
　　2.1 检测结果 198例NGU患者尿道念珠菌培养阳性共18例（9.09%），其中白念珠菌13例（72.22%），光滑念珠菌3例（16.67%），近平滑念珠菌2例（11.11%）。65例正常对照组尿道念珠菌培养阳性1例(1.54%)，为白念珠菌，两组阳性率经统计学处理，有显著性差异（X²=4.16，P<0.05）。见表1。
表1 患者组及对照组尿道念珠菌培养结果 例（%）

　　2.2 念珠菌感染者临床特点 18例患者年龄21-48岁，平均30.5岁，病程最短1个月，最长18个月，平均4个月；均有非婚性接触史，性伴数在2个以上8例；既往患过淋病者3例；1个月内有抗生素使用者14例；同时合并念珠菌性龟头包皮炎者1例；性伴有念珠菌性阴道炎者6例；有尿频症状5例，尿急3例，尿道刺痒、涩痛10例，尿道口潮红12例，尿道口稀薄分泌物7例。
　　2.3 治疗方法 对18例念珠菌阳性者给予氟康唑每次100mg，空腹口服，每天1次，共服10天，疗程结束停药1周后复查，结果15例临床症状全部消失，17例念珠菌培养转阴性。
　　3 讨论
　　男性NGU患者通常表现为尿道口灼热、瘙痒、排尿困难及尿道口有分泌物等症状，很多患者久治不愈，通常认为引起此类症状主要是由沙眼衣原体和解脲支原体感染所致[3]，但近年来随着广谱抗生素的广泛应用，男性NGU患者中念珠菌感染也有逐渐增多的趋势[4],据文献报道男性NGU患者中念珠菌的检出率为4.94%~10.84% [5，6]。本研究中，我们对198例NGU患者尿道分泌物进行念珠菌培养，阳性率为9.09%，与廖元兴等[6]的报道相接近，而健康男性对照组阳性率仅1.54%，两组相比，经统计学处理，有显著性差异（P<0.05），表明男性NGU患者存在念珠菌感染，临床上一部分NGU患者的尿道症状同念珠菌感染有一定关系，提示念珠菌感染可能是男性NGU的一个有意义的致病因子。
　　念珠菌是寄住在人体内的一种条件致病菌，可与体内多种微生物共存，维持正常体内微生态平衡，一般不会导致疾病。男性NGU患者念珠菌的感染，是由于长期使用广谱抗生素，破坏了体内正常菌群，从而导致尿道内寄生的念珠菌大量繁殖所致[5]。本组18例念珠菌阳性患者中有14例（77.8%）一个月内有抗生素使用史，有的经多种抗生素治疗后尿道症状仍存在，提示NGU在多种抗生素治疗无效时要想到念珠菌感染的可能，应及早进行念珠菌检测，以明确诊断，使患者得到及时有效的治疗，避免滥用抗生素。
　　从本组病史资料看，18例念珠菌阳性患者均有婚外不洁性交史，其中8例（44.4%）有2个以上性伴，6例 (33.3%) 患者其性伴有念珠菌性阴道炎，提示念珠菌可以通过性交传染。本组患者病程较长，平均4个月，临床表现为不同程度尿道刺痒、涩痛、灼热或尿道不适，间断有少许稀薄分泌物等尿道炎症状。18例患者经口服氟康唑治疗1个疗程，15例（83.3%）患者达到临床治愈，17例（94.4%）患者念珠菌复查转阴性，表明氟康唑是治疗由念珠菌感染引起的NGU有效药物。
　　〔作者单位：广东省汕头市皮肤医院〕
参考文献
1 叶干运. 性病防治手册. 第2版. 南京：江苏科学出版社，1990. 45.
2 吴绍熙. 现代医学真菌检验手册. 北京: 北京医科大学中国协和医科大
学联合出版社, 1998. 355-356.
3 周劲松, 闫玲, 冯树异, 等. 非淋菌性尿道炎与单纯疱疹病毒2型感染关系的研究. 中国皮肤性病学杂志，2003,17(4): 255-259.
4 Janier M, Lassau F,Casin I,et al. Male urethritis with and without discharge: a clinical and microbiolobical study. Sex Transm Dis, 1995,22: 244-252.
5 李军, 郑和义, 孙秋宁,等. 男性非淋菌性尿道炎患者尿道中念珠菌的分离及药敏分析. 中华皮肤科杂志, 2004,37(12): 732-733.
6 廖元兴, 杨庆永, 梁洁. 男性STD患者念珠菌性尿道炎213例临床研究. 中国麻风皮肤病杂志, 2005,21(3): 178-180.

基因芯片检测人乳头瘤病毒 23种亚型的应用评价

　　[摘要] 目的：为了解基因芯片检测性病门诊患者HPV23种亚型感染的临床应用价值。方法：利用标记有生物素的HPV通用引物进行PCR扩增，扩增产物变性后与固定在尼龙膜上23种HPV特异性分型探针进行反向斑点杂交检测HPV亚型，同时采用荧光定量PCR检测HPV6/11和HPV16/18作比较。结果：200名患者标本中，基因芯片阳性率47.04％, 其中单一亚型感染63例，重叠感染31例。共检出亚型15种，6和11型的总检出率为38.5％，16和18型的总检出率为7.5％；荧光定量PCR阳性率40.0％，其中6/11总检出率为37.0％，16/18总检出率为7.0％。以基因芯片为基准，荧光定量PCR漏诊率为17.02％；以荧光定量PCR为基准，基因芯片漏诊率为2.50％。结论：基因芯片一次试验可联合检测多种HPV亚型感染并分型，对研究性病门诊患者HPV感染型别的分布，提高由HPV各亚型引起的癌症病变的防治水平具有重要意义。
[关键词] 基因芯片；人乳头瘤病毒；亚型；

　　人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）是一组DNA病毒，可引起人类上皮细胞增生及乳头瘤样改变。在已知的130多种人乳头瘤病毒亚型中，有超过30多型可以感染人的生殖器官[1-3]。目前实验室检测HPV亚型感染的方法主要是核酸杂交和扩增试验。HPV基因芯片集PCR、芯片技术和反向斑点杂交技术（reverse dot blot，RDB ）于一身，具有分析通量大，可准确、快速检测临床标本中多个HPV亚型感染（5种低危型：6、11、42、43、44和18种高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4）的特点。为了解基因芯片检测HPV感染的方法学特点，我们对临床送检的200份性病患者标本同时进行基因芯片和荧光定量PCR检测，现将结果报告如下：
　　一、材料与方法
　　1. 材料
　　1.1标本来源 200名患者于2005年10月～2006年1月间来自我院性病门诊就诊，其中男132例，女68例，年龄18～71岁，平均年龄32.6岁。经临床诊断为尖锐湿疣（CA）的患者72例；自诉曾经在外院或本院按CA治疗或性伴感染过HPV，目前未见明显临床体征的HPV亚临床感染者30例；因患阴道炎、宫颈炎、尿道炎、龟头炎要求性病体检者98例。
　　1.2取材方法 CA患者用沾有无菌生理盐水的无菌拭子用力反复摩擦疣体表面数次；亚临床感染者用无菌拭子常规方法取尿道/宫颈拭子或在以前发病部位反复摩擦数次；男性体检者中龟头炎患者用无菌拭子常规方法取龟头皮屑，尿道炎患者用无菌拭子常规方法尿道拭子，女性体检者用无菌拭子常规方法取宫颈拭子。所有标本置无菌试管中立即送检，不能在24小时检测者置－25℃保存。
　　1.3主要仪器 5700型全自动荧光定量PCR分析仪购自美国Perkin Eleer(PE)公司；5714R高速冷冻离心机购自德国Eppendorf公司；杂交孵育箱购自韩国FINEPCR公司。
　　1.4试剂 HPV基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供；HPV6/11和HPV16/18荧光定量PCR试剂盒由中山大学达安基因诊断中心提供。
　　2. 方法
　　2.1标本核酸提取 往标本管加入1ml无菌生理盐水，充分振动，弃拭子，液体倒入1.5ml离心管中，13000转/min离心10分钟，弃上清后加入DNA提取液50ul，混匀，闭管沸水浴10分钟，置4℃冰箱6～8小时。不能及时检测时置－20℃冰箱保存。
　　2.2荧光定量PCR检测
　　2.2.1 PCR扩增 将标本提取管13000转/min离心10分钟，取上清液5ul加入PCR反应管中。另取阴性对照和5个阳性对照标准品(病毒拷贝数为106、105、104、103和102)各5μl分别加入到不同PCR反应管中。所有反应管6000转/min离心数秒，取出按顺序放入5700型全自动荧光定量PCR仪检测槽中，按下列条件扩增：93℃2min预变性后，93℃ 45s、55℃ 1min循环10次，93℃ 45s、 55℃ 30s循环30次，反应时间为101min。
　　2.2.2反应结果经计算机处理直接给出定量结果。
　　2..2.3结果判断 阳性对照管的荧光强度对应反应循环数曲线应呈较典型的S型曲线，阴性对照管则无此特征，否则实验视为无效。检测样本曲线呈典型的S型曲线且Ct值<27时，报告为阳性
　　2.3 HPV基因芯片检测
　　2.3.1阴性对照和阳性对照制备：阴性对照使用无菌生理盐水。阳性对照采集临床典型CA患者标本，经常规核酸提取，在PE-5700型荧光定量PCR仪上检测为HPV6/11阳性或HPV16/18阳性后，分离标本上清液，分装每管10ul，－20℃保存。
　　2.3.2 PCR扩增 取试剂盒中PCR反应管，在管壁上做好标记，6000转/min离心2秒，分别加入待测样品上清液、阴性对照和阳性对照各5uL，最后每管加入无菌矿物油1滴。所有反应管6000转/min离心数秒。按顺序放入5700型荧光定量PCR仪检测槽中，按以下条件进行扩增：50℃，15min；95℃，10min预变性后，94℃ 30s；42℃ 90s；72℃ 30s循环40次；72℃延伸5min；4℃ 保持。
　　2.3.3杂交和显色 将PCR扩增产物和固定有23种HPV分型探针的尼龙膜放入装有5ml杂交液（2×SSC，0.1％SDS，PH7.4溶液）的离心管中，沸水浴10min后在杂交箱51℃杂交1h。将膜条移至51℃预热的洗涤液A（含0.5×SSC，0.1％SDS，PH7.4溶液）中，于51℃轻摇洗涤15分钟。将膜条移至新鲜配制的POD（链霉抗生物素蛋白－辣根过氧化物酶结合物）溶液中，室温轻摇浸泡30分钟，弃去POD溶液。用杂交液室温摇洗2次，每次5min，再用洗涤液B(0.1M柠檬酸钠，PH5.0)室温洗膜2min。最后将膜条浸泡于显色液（0.42mM TMB，0.004％H2O2，0.1M柠檬酸钠，PH5.0）中，避光显色20分钟后弃显色液，加自来水洗涤终止反应。
　　2.3.4结果判断 ①每张膜条（包括阴性对照）都应该在PC点出现蓝色斑点。②阴性对照在膜条上的23个HPV亚型位点均没有蓝色斑点。③阳性对照样品在膜条上相应的亚型位点上应出现蓝色斑点，而其他亚型位点未出现。在符合上述条件下，待检标本在23个亚型位点上出现蓝色斑点即可判定在相应位置标记的HPV亚型阳性。
　　2.4 HPV基因芯片重复性试验 将16份荧光定量PCR试验阴性而基因芯片阳性的标本和2份荧光定量PCR阳性而基因芯片法阴性的标本，另外选取5份基因芯片多重感染的标本和5份两种方法检测均阴性的标本共28份再次进行基因芯片检测。
　　2.5 HPV基因芯片灵敏度试验 通过荧光定量PCR室间对比实验，选择1份HPV6/11结果为106拷贝和1份HPV16/18结果为106拷贝的标本，分别取上清液20ul用无菌生理盐水稀释为含105、104、103、102和10个病毒拷贝的待检样本进行基因芯片检测。
　　二 结果
　　1． 荧光定量PCR检测结果
200份临床送检标本中，HPV阳性80例，阳性率40.0％。其中6/11阳性66例，16/18阳性6例，6/11合并16/18阳性8例，分别占阳性例数的82.5％、7.5％和10.0％。6/11总检出率为37.0％（74/200），16/18总检出率为7.0％（14/200）。
　　2．HPV基因分型检测结果
　　200份临床送检标本中，HPV阳性94例，阳性率47.04％。其中单一亚型感染63例，占阳性率的67.02％，重叠感染31例，占阳性率的32.98％。共检出亚型15种，6和11型的总检出率为38.5％（77/200），16和18型的总检出率为7.5％（15/200）。各亚型分布见表1。

　　3．荧光定量PCR和基因芯片检验结果比较
　　荧光定量PCR检测HPV6/11和HPV16/18均为复合型，阳性标本用基因芯片检测时出现单一亚型6、11、16、18或双重感染6和11，16和18均属两种方法检测结果符合。在200份临床送检标本中有2例荧光定量PCR HPV6/11阳性而基因芯片法阴性，16例荧光定量PCR阴性而基因芯片法阳性，其余182例标本检验结果符合，其中阳性结果78例，阴性结果104例，两种方法检验结果符合率为91.0％。删除16例仅由6、11、16、18以外亚型感染的标本，剩余184例患者标本以荧光定量PCR法为金标准，对基因芯片的方法学进行评价，结果为特异性100％，敏感性97.5％，有效性98.9％，阳性预测值100％，阴性预测值98.1％。详见表2。
表2： 200份送检标本荧光定量PCR和基因芯片检查HPV结果对比表

　　4．HPV基因芯片重复性试验结果
　　28份重复性实验的标本中，27份两次试验结果一致，有一份标本第一次试验结果为6、11，第二次试验为6、11和33，但33亚型斑点较弱。重复性试验结果符合率为96.43％（27/28）。
　　5．HPV基因芯片灵敏度测试结果
　　HPV6/11病毒载量为105、104、103、102和10拷贝的5份待检样本中，105、104和103病毒拷贝的三份标本基因芯片检测6型阳性，而102和10病毒拷贝的两份标本结果阴性；HPV16/18病毒载量为105、104、103、102和10病毒拷贝的5份待检样本中，基因芯片均能检测出16型阳性。说明HPV基因芯片灵敏度为10～1000个病毒拷贝。
三 讨论
　　近年来，HPV病毒引起的生殖道感染发病率逐年上升，在我国已跃居性病的第二位【2】。根据病毒致病力大小，HPV分为高危型和低危型。高危型HPV可导致宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)，多见于高龄妇女，不易自然缓解，与宫颈癌的发生关系密切。低危型HPV，主要引起尖锐湿疣及低度CIN等，自然缓解率较高[3]。
　　基因芯片技术是近年发展起来的新技术，目前在感染性疾病诊断的应用尚属起步阶段。荧光定量PCR技术拥有高特异性、高敏感性、污染机会低等优势，目前已广泛应用于各种病原体的检测与研究【4】，但应用于检测HPV感染的亚型少而且不能分型，目前仅能检测6/11和16/18，漏诊率较高。HPV基因芯片利用标记有生物素的引物进行PCR扩增，扩增产物变性后与固定在尼龙膜上HPV特异性分型探针进行杂交，生物素与链霉抗生物素蛋白－辣根过氧化物酶结合物结合，后者与TMB发生显色反应从而在膜条上显示蓝色斑点，达到对多种HPV亚型联合检测与分型的目的。国内有学者利用该技术对人乳头瘤病毒感染进行分型检测研究并给予较高评价[5－7]，但这些报道不是存在检测亚型少，就是研究的标本量太少，所报道的结果与实际情况可能存在一定的偏差。从我们的检测结果发现，在200份临床送检标本中，HPV基因芯片阳性94例，阳性率47.04％；荧光定量PCR阳性80例，阳性率40.0％。以基因芯片为基准，荧光定量PCR有16份标本漏诊，漏诊率为17.02％（16/94）；以荧光定量PCR为基准，基因芯片有2份标本漏诊，漏诊率为2.50％（2/80）。其中荧光定量PCR16份标本漏诊的原因是由于患者感染的HPV亚型不是6、11、16和18造成的，而基因芯片技术漏诊的2份标本均取自于两名有典型CA症状的患者，经室内和室间的荧光定量PCR重复实验，结果均为HPV6/11-DNA阳性，而且病毒的载量均在104以上，而基因芯片重复检测结果仍为阴性。这可能是固定在尼龙膜上的23种HPV分型探针中，6和11亚型探针在设计上存在不足，制备出来的探针不能与所有的HPV6和HPV11亚型特异结合，导致部分患者漏诊。此结果提示我们，由于HPV各种亚型的基因序列容易发生变异[8]，需要定期总结，不断优化23种HPV亚型探针的设计，才能避免漏诊。另外在72例临床诊断为CA的患者中发现，有4例患者的标本经两种方法检测，结果均为阴性。由于4名患者已做了激光手术，未能重新取材检查，究竟是临床取材不足，还是两种方法均漏诊，有待进一步深入研究。但此结果提示我们一方面需要增加HPV亚型的检测数量，另一方面可以针对检测病种HPV感染亚型的差异，优化组合，制备检测不同病种的基因芯片，进一步提高基因芯片应用于HPV感染诊断的临床应用价值。
　　从HPV基因芯片试验的方法学看，以荧光定量PCR检测HPV6/11-DNA和HPV16/18-DNA四种亚型为标准，评价HPV基因芯片试验检查HPV6、11、16、18等亚型的特异性达100％，敏感性达97.5％，有效性达98.9％，阳性预测值达100％，阴性预测值达98.1％，此结果可以在一定程度上反映HPV基因芯片试验的结果具有较高可信度。从试验的重复性看，基因芯片重复性试验结果符合率为96.43％。由于多重感染，杂交过程中存在产物的竞争性结合，当某个亚型浓度较小而其他亚型浓度较大时，就可能在探针与产物杂交时，竞争不到原料而导致浓度较小的亚型不能检测出来。这可能是造成我们重复性试验有一份标本结果前后不一致的原因。从试验的灵敏度看，基因芯片法在产物扩增中设定40个循环，比荧光定量PCR多10个循环，从而增加杂交的产物浓度，使其灵敏度也达到10～1000个病毒拷贝。
　　综上所述，HPV基因芯片试验与荧光定量PCR比较，具有较高的特异性、敏感性、有效性、阳性预期值、阴性预期值、重复性和灵敏度。一次试验可联合检测23种HPV亚型感染并分型，对研究性病门诊患者HPV感染型别分布特点和提高由HPV各亚型引起的癌症病变的防治水平具有重要意义，值得临床推广应用。 [作者单位：汕头市皮肤性病防治院]
参考文献
[1]Wald NJ,Georgel,Smith D,et al, Serum screening for Down‵s syndrome between 8 and 14 weeks of pregnancy[J].Br.JObstetGynecol,1996,103:407-412.
[2] 叶顺章，邵长庚主编，《性病诊疗与预防》，人民卫生出版社，2002，1，第1版：252-254。
[3]王莉，张文夺 综述 归绥琪 审校. HPV持续性感染与免疫调节机制[J]，现代妇产科进展 2004，13（2）：134-136.
[4] 王小红. 荧光定量PCR技术研究进展[J]. 国外医学分子生物学分册 2001，23(1):42～45.
[5] 黄庆，府伟灵，周玉等. 基因芯片对人乳头瘤病毒的快速检测和分型[J]. 中华医院感染学杂志2005,15(4):476-478.
[6] 杨柳光 蒋利君 李卓园等. 基因芯片技术在HPV分型检测中的运用[J]。广西医学 2005，27（8）：1163～1165.
[7] 刘翠华，马文丽，张 宝等. 人乳头瘤病毒(HPV)基因芯片的研究[J]，微生物学报 2003，43（5）：613～617.
[8] 许延贵，王敬云，张惠珍等. HPV的分子生物学特征及其致病机理[J]，国外医学病毒学分册 2004，11（1）：1-5.

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　蔡晓丹 陈建宁

　　【摘要】丹参是传统活血化瘀的中药之一，其化学单体有50余种。本文根据现代对丹参化学成分活性物质进行的研究，从药理作用、临床应用、配伍宜忌三大方面进行了综述。
　　【关键词】丹参 综述
　　丹参为唇形科植物，多年生草本，根味微涩，是传统活血化瘀的中药之一。其化学单体有50余种，可分为水溶性和脂溶性两大类，水溶性成分种提取的单体有丹参素，并分离出含甙物质、强酸性及黄酮类物质，目前用于临床的水溶液成分多系丹参素。丹参脂溶性成分先后分离出15种单体，其余都是二萜醌类化合物，包括有丹参酮－I、丹参酮II－A、隐丹参酮、丹参酮II－B、羟基丹参酮II－A、丹参酸甲酯、异丹参酮I、异丹参酮II－A、异隐丹参酮、丹参新酮和丹参乙酸镁等。此外尚含原儿茶酸、原儿茶醛、维生素E等。现代对丹参化学成分活性物质进行了研究，印证了“一味丹参，功同四物”的内涵。
　　（一） 药理作用
　　1、 对微循环的作用【1】：
　　以实验家兔外周微循环障碍病理模型，观察丹参和丹参素对微循环的影响，结果表明给药后血液流速显著加快，毛细血管网开放数目增多，网织红细胞数增多，60％以上的动物的血液流态改善，如血细胞有不同程度的解聚现象，血液流动由粒状或断线状变为正常。说明丹参具有改善微循环障碍，从而改善细胞缺血缺氧所致的代谢障碍作用。
　　2、 对血凝的作用：
　　（1） 对纤维蛋白溶解（纤溶）的作用，纤维蛋白的溶解活性处于低水平成为血瘀患者病变过程中的危险因素之一。根据副凝试验和葡萄球菌聚集试验的结果，证明丹参能强有力地使纤维蛋白降解【1】。
　　（2） 在电镜下观察丹参对应激大白鼠心肌小血管内血小板解聚的影响，发现给药后血小板解聚的作用。又在试管中证实丹参制剂能使血小板内cAMP浓度明显增高，高浓度时有促使血小板解聚的作用【1】，抑制血栓形成，抑制血小板合成前列腺素。
（3） 丹参中3种化学提取均有抗凝作用，以丹参酮最强，原儿茶醛次之，第三为丹参素【1】。
（4） 能清除自由基，抑制自由基引起的机体损伤。
　　3、 对血液流变学的影响：
　　经用丹参注射液治疗后全血粘度、血浆粘度、红细胞电泳时间、红细胞压积、红细胞沉降率恢复明显，降低血管阻力，扩张血管，降低脑缺血再灌损伤所致的卒中指数，减轻脑水肿，对脑缺血后的引起的神经元损伤有明显的保护作用。
　　4、 对结缔组织的作用【1】：
对丹参治疗前后的疤痕组织的超微结构观察，治疗后纤维母细胞的数量显著减少，分泌胶原的功能低下，组织细胞增多，肥大细胞增加，血管数量增多。表明丹参有促进增生变性的结缔组织转化、吸收、抑制亢进的胶原合成作用。
　　5、 抗肿瘤作用：
　　主要是诱导肿瘤细胞的分化和凋亡：
　　（1） 体外试验结果：丹参酮对多种肿瘤细胞具有明显诱导分化和凋亡作用；丹参酮II－A可明显诱导体外培养的人早幼粒白血病细胞株HL-60、NB4、人慢粒红白血病细胞株K562、人肝癌细胞株SMMC-7721、人肺癌细胞株SPC-A-1、人胃癌细胞株SGC7901、人鼻咽癌细胞株CNE1等分化和凋亡，对白血病细胞的诱导分化率达90%以上。
　　（2） 体内实验结果： 丹参酮ⅡA对小鼠肝癌H22有明显抑制作用，抑瘤率为40-50%（P<0.01），而对动物体重变化及一般情况无明显影响；丹参酮能抑制Lewis肺癌细胞在小鼠体内的肿瘤形成能力，并能抑制原发肿瘤的肺转移。
　　（3） 临床实验研究结果：丹参酮对临床急性早幼粒细胞白血病(APL)患者APL细胞的生长抑制率为39.7%，诱导分化率为82.5%，明显促进APL细胞分化成熟；丹参酮被应用于临床维甲酸治疗不能缓解的APL患者，平均治疗2个月可获完全缓解，并无任何毒副作用。
6、 抗菌、消炎及抗雄性激素作用，抑制皮脂腺增生作用【2】
丹参酮在体外抑菌试验中对痤疮丙酸杆菌有高度抑制作用【3】。

　　（二） 临床应用
　　1、 银屑病
　　银屑病患者微循环障碍的组织学和临床表现，与中医认为银屑病患者存在的血瘀现象是相一致的。一些学者进行了血液流变学、甲襞微循环以及相关指标的检测，进一步探讨了丹参活血化瘀作用及治疗银屑病的机理【4】。
　　（1） 赵广琼等用丹参粉针剂静脉输液治疗80例寻常型银屑病，进行治疗前后的血液流变学观察。结果显示有良好疗效，治疗后患者的血液粘度、血浆粘度、血小板黏附率均降低。
　　（2） 王丽江等对50例寻常型银屑病患者采用丹参液静脉滴注，治疗前后对患者甲皱微血管形态、血流动态及血管周围状态进行甲皱微循环观察，根据田氏甲皱微循环综合评价方法，进行综合判断，结果治疗前后患者甲皱微循环得到明显改善。
　　（3） 方春红等以低强度氦－氖激光血管内照射与复方丹参注射液联合治疗33例寻常型银屑病患者，观察了治疗前后血液流变性变化及疗效，结果治疗前后血液表观粘度 、血液还原粘度、血浆粘度、血浆纤维蛋白原、红细胞压积、红细胞沉降率等参数在治疗后较治疗前明显下降。
上述资料表明丹参在改善银屑病患者微循环障碍方面有着独特的优势。
　　2、 痤疮
　　（1） 陈海亭等【5】利用丹参酮治疗48例痤疮患者，总有效率87.5％，痊愈率33.3％。观察到丹参酮对各种类型痤疮均有不同程度疗效，其中脓疱性、炎性丘疹效果最佳，但囊肿性效果较差，黑头粉刺无效。
　　（2） 刘卫兵等【3】利用主要成分为丹参的中药面膜加超声导入治疗面部寻常痤疮，证实丹参酮具有明确抗菌消炎及抗雄性激素作用，还有较强的抑制皮脂腺增生作用。
　　（3） 马氏【6】及兰氏【6】进行实验研究表明，丹参能降低女性迟发性寻常痤疮患者血清T水平，对女性迟发性与持久性痤疮患者神经生长因子、性激素与细胞因子水平有调节作用。
　　3、 斑秃
　　董秀云等【7】利用丹参对69例斑秃患者进行治疗，发现血管形、管周状态及总积分值下降十分明显，血流速度加快、连续均匀，红细胞聚集减轻，血管内红细胞停流消失，证实斑秃患者采用活血化瘀治疗优于其他疗法，为斑秃治疗提供一条新途径。
　　4、 纤维化硬化相关疾病
　　（1） 心脑血管硬化：心肌梗塞、冠心病、心绞痛、脑卒中。
上海药物所的研究阐明：以丹参乙酸镁为主要成分的多酚酸盐是丹参中最重要的有效活性部位丹参多酚酸盐的临床前药理学研究显示：丹参多酚酸盐在动物心肌梗塞模型和心脏缺血再灌注损伤试验中，能使心肌缺血程度显著下降，心肌缺血范围缩小，减轻心肌缺血时的细胞损害，具有显著的抗心肌缺血作用。同时丹参多酚酸盐可降低心脏耗氧量，并能对抗ADP诱导的血小板聚集、扩血管和抑制血栓形成。其特点是在治疗剂量范围内不影响心脏血液动力学功能。
　　（2） 肝硬化
　　王爱民等【8】报道丹参防治肝纤维硬化作用，还发现丹参可提高肝脏成纤维细胞酶原酶的合成分泌。
　　（3） 系统性硬皮病
　　已证实丹参可抑制皮肤成纤维细胞合成【9】【10】、增殖和生长【9】【11】，调节硬皮病成纤维细胞基质金属蛋白酶1（又称间质胶原酶1）的合成【12】，包括提高其蛋白合成分泌及mRNA表达。
　　5、 广谱抗肿瘤作用
　　（1） 临床实验表明，丹参酮制剂用于某些类型白血病（急性早幼粒细胞白血病，慢粒红白血病）的治疗，与分化诱导剂全反式维甲酸比较疗效无显著差异，且无毒副作用和耐药现象。
　　（2） 丹参酮治疗肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、鼻咽癌
90年代初期，上海中医学院、肿瘤医院、曙光医院等应用30多种丹参复方剂治疗食管癌、胃癌等多种癌症，疗效明显。
　　6、 高血压病
　　丹参其有效成分可解除小动脉痉挛，增加冠脉血流量，降低血液粘稠度，中枢神经抑制，降低血压【13】。
　　7、 防治老年痴呆症
　　复方丹参片能够从多途径延缓脑衰老、改善记忆功能和认知功能，防治老年痴呆症效果显著。“复方丹参片防治老年痴呆症“的研究课题已获得国家颁发的专利证书。
　　8、 糖尿病
　　（1） 丹参能降低糖尿病患者血小板聚集功能，主要作用为抑制血小板合成前列腺素，抑制血小板黏附聚集。
　　（2） 有学者对II糖尿病患者初步观察50例发现其对改善临床症状，降低血糖、尿糖，调整脂类代谢紊乱，防治并发症方面均有较好疗效
　　9、 其他【14】
　　（1） 弥漫性血管内凝血（DIC）、脉管炎、神经衰弱、失眠、腰背痛
　　（2） 小鼠连续5日肌注丹参煎剂注射液，能明显吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数
　　（3） 复发丹参注射液可使慢性气管炎伴肺心病患者T淋巴细胞百分率上升

　　（三） 配伍宜忌
　　随着中西医结合研究的深入，丹参与西药联用也日益普遍，研究发现，其与西药，既有协同作用，也有拮抗作用。现就其配伍宜忌介绍如下。
　　1、丹参与西药的合理配伍
　　（1）丹参注射液与抗生素类合用时，可增强抗生素的抗炎作用。丹参注射液与抗生素合用治疗成人急性肺炎，其疗效明显优于单用抗生素治疗；与乳酸红霉素配伍应用，还可提高红霉素的稳定性；与卡那霉素合用，能减轻卡那霉素对耳蜗的毒性反应，促进耳蜗毛细胞的能量代谢；与庆大霉素合用，可减轻庆大霉素的肾损害作用，对抗庆大霉素的肾毒性。
　　（2）丹参注射液与肝素合用，在抗高凝方面有协同作用。观察发现，丹参注射液静脉滴注与肝素雾化吸入联合治疗肺原性心脏病患者出现高凝状态有较好的效果，显著优于单用丹参或肝素治疗。
　　（3）丹参注射液与东莨菪碱合用，在解除小动脉痉挛，降低血液粘稠度和镇静诸方面有协同作用，治疗高血压病其疗效优于单用东莨菪碱，可提高降压疗效。
　　（4）丹参注射液与酚妥拉明合用，在改善肝脏微循环方面有协同作用，因为酚妥拉明能减少肝脏血管床的阻力及减轻肝脏微血管的痉挛状态，而丹参能扩张血管，改善血液的流变性，故两者合用有较强的活跃肝微循环的作用。
　　（5）丹参注射液与硫酸镁合用，治疗偏头痛方面有协同作用，因丹参能调节血管舒缩功能，改善体内血流量及轻度抑制中枢神经系统而降低神经兴奋性，因此与硫酸镁合用，能增强镇痛、镇静作用。
　　2、丹参与西药的不合理配伍
　　（1）丹参注射液不能与抗癌药，如环磷酰胺、环己亚硝胶、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、争光霉素、自力霉素等合用。观察发现两者未见明显的增效作用，且丹参注射液用不同方式给药，均能促进恶性肿瘤转移。
　　（2）丹参注射液不能与维生素C合用，两者可产生络合效应，生成丹参酚-铁络合物，使注射液色泽变深，甚至产生混浊，从而降低疗效或作用消失。
　　（3）丹参注射液不能与止血药和维生素K、凝血酶等合用，因丹参能抑制血小板功能。抑制凝血功能、激活纤溶系统，促进纤维蛋白原溶解为纤维蛋白原降解产物(FDP)，从而拮抗抗纤溶药，降低止血药物的功效。
　　（4）丹参及含丹参的中成药不宜与抗酸药，如三硅酸镁、氧化镁合剂、复方氧化镁合剂、镁乳、胃舒平、胃得乐片、胃钟镁等合用，两者可产生络合效应而形成赘合物，降低丹参的生物利用度，影响疗效。
　　（5）丹参及含丹参的中成药不能与士的宁、麻黄碱、维生素B1、维生素B6等合用，丹参含的儿茶酚酸及4-二羟基乳酸的活性成分具有鞣质的特性，与上述药物合用可产生沉淀，降低药物的疗效。
　　（6）丹参及含丹参的中成药不宜与阿托品合用，阿托品为阻断M-胆碱能受体的抗胆碱药，具有解除迷走神经对心脏的抑制而使心率加速的作用。两者合用时，丹参所具有的降低血压的效应，能被阿托品所阻断，从而降低丹参的药效。
　　（7）丹参及含丹参的中成药不宜与雄激素类药物，如甲基睾丸素、丙酸睾丸酮等合用，丹参的活性成分有拮抗雄激素的作用，两者合用可降低雄激素的活性，从而影响雄激素的疗效。
　　（8）丹参不宜与阿司匹林等药物合用，某些中西药有相同或相似的药理作用，合用时可表现为作用增强，具有活血化瘀作用的丹参或含丹参成分的复方剂型(如丹参片、复方丹参滴丸等)与阿司匹林、华法令等抗凝血药物合用时，可使作用增强，但易导致出血。
　　（9）丹参不宜与心得安合用，因心得安可阻断丹参扩张支气管的作用，能使心跳减慢、减弱等，丹参酮具有拮抗心得安收缩冠状动脉的作用。〔作者单位：汕头市皮肤性病防治院〕

参考文献
【1】 秦万章.微观研究促进皮肤科中西医结合发展创新.第四届全国中医中西医结合皮肤性病研究进展学习班讲义和论文汇编，2005：1-2
【2】 秦万章.皮肤病研究.上海：上海科技出版社，1990，131
【3】 刘卫兵，王静.中药面膜加超声导入治疗面部寻常痤疮疗效观察【J】.中国麻风皮肤病杂志，2003，19（5），499
【4】 钟金宝，卢传坚.银屑病的中医药研究进展. 第四届全国中医中西医结合皮肤性病研究进展学习班讲义和论文汇编，2005：163-170
【5】 陈海亭，赵晔，巴东霞.丹参酮治疗痤疮48例疗效观察【J】.临床皮肤科杂志，2002，31（8）：503
【6】 冯洁莹.中医药治疗女性痤疮的临床研究概况. 第四届全国中医中西医结合皮肤性病研究进展学习班讲义和论文汇编，2005：183-187
【7】 董秀云，李公宝，张丽珍，等.丹参对斑秃患者甲皱微循环的影响. 中国麻风皮肤病杂志，2003，19（5）:457-458
【8】 王爱民，王宝恩，董忠，等.复方丹参合剂提高胶原酶活性逆转实验性肝纤维化.中华皮肤科杂志，1997，5：56-57
【9】 张玄，李世荣，李荟元，等.丹参对增生性瘢痕成纤维细胞形态的影响及增生初探.中华医学美容杂志，1999，5，73-76
【10】 李明，王强，杨春欣，等.丹参对系统性硬皮病成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.中华皮肤科杂志，1998，31，22-24
【11】 王芊，曹德君.丹参对培养的人瘢痕成纤维细胞生长和胶原形成的影响.中国临床药学杂志，2002，11，46-48
【12】 郑学毅，唐培昀，曾仁山.丹参对硬皮病成纤维细胞基质金属蛋白酶I作用的研究.中南地区皮肤性病学术会议论文集，2004，171-173
【13】 孔海云.现代自身免疫病学.北京：人民军医出版社，1996，1：144-145
【14】 陈新谦，金有豫.新编药物学第14版.人民卫生出版社：563-564

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　林爱斌

[摘要] 目的:为皮肤科门诊病人提供直接、优质的药品保健服务。方法:在医院内设立药品保健科，搜集新的药理知识和药物信息，制订服务内容、服务对象和服务程序。结果:实现了将新的药理知识和药物信息应用于临床，促进了合理用药。结论:此方法能够为皮肤科门诊病人提供直接、优质的药品保健，也为其它医院开展药品保健提供借鉴。
[关键词] 药品保健；皮肤科；门诊病人；药学服务

　　据WHO提供的材料表明，目前全球有1／3的患者死于用药不当，有1／7病死者的死因是不合理用药。据中央电视台提供的资料：我国2001年不合理用药的比例为11％～26％， 由此造成的药源性疾病 ，导致全国19.2万人死亡。由此可见，在医院内开展药学服务十分重要。
l 搜集新的药理知识和药物信息
1.1 及时了解药品动态 对药检部门抽检和上级主管部门通知的不合格药品，第一时间通知已经使用该药的患者停止服用。
1.2 订购专业资料 订购医、药学专业核心期刊、书籍，学习新的药物知识，发现刊登新的严重不良反应和配伍禁忌，尽快与患者联系，对药物进行综合评价，指导患者合理用药。
1.3 网络资源 建议每天上网一次，发现新的不良反应和配伍禁忌，立即将它记录并应用于临床。主要的网站有：www.freemedicaljournals.com(目前包含的免费联机期刊数目达910种)、www.Free-BooksDoctors.com(可以免费访问500多本医学书籍)、www.medmatrix. org(美国医学信息学会建立，以搜集网上临床医学信息为主，收录的网站全部经过资深医学编辑的认真评估，以保证质量)[1]、www.pmph.com(人民卫生出版社)、www.sda.gov.cn(中国国家药品监督管理局)、www.moh.gov.cn(中华人民共和国卫生部)。
1.4 光盘刻录 将搜集的知识刻录成光盘，编排检索顺序，并定期更新内容，以便为患者提供药品保健服务。
2 药品保健科的服务内容
2.1 记录患者资料 设计“皮肤科药品保健表”，见表l。由患者在表上记录其个人资料。
2.2 审查医生处方 对有下列错误的处方提示医生给予纠正[2]，综合分析后对患者使用药品提出建议。
2.2.1 药理作用 药剂师根据患者的个人资料，从每个药物的药理作用方面判断医生处方中所列药品是否合理。
2.2.2 合并用药情况 结合患者正在服用的药品，判断处方中的是否存在下列问题：①相互作用引起不良反应，包括西药与西药间的相互作用、西药与中药间的相互作用、中药与中药间的相互作用。②相互作用使药物的疗效过高或降低。③重复用药。
2.2.3 剂量 分析处方中药品的剂量是否合适，特别是麻醉药品、精神药品、毒性药品和放射性药品的每张处方必须在国家要求的剂量范围内，防止滥用药物造成医疗费用过高或者产生不良反应。
2.2.4 用法 分析处方中药品剂型、规格、给药途径是否恰当，是否有需要皮试的药物。
2.3 分析食物与药物的关系 ①分析饮食对药物代谢动力学的影响[3]，判断医生处方中的药品是否存在与某些食物的相互作用。②考虑饮食习惯及生活方式对药物治疗的影响[4]。③对药物治疗过程中患者所吃的食物和日常作息提出建议，使治疗过程更加顺利。

表1 皮肤科药品保健表
Tab 1 Medicine care of dermatology department

3 药品保健科的服务对象和服务程序
3.1 服务对象 ①皮肤病较严重患者、或全身性皮肤病患者。②有特殊体质或特殊病理状态的患者。③提出咨询要求的患者。
3.2 服务程序 按先后次序为：①门诊医生开列药品处方后，建议门诊患者进行药品保健咨询。②患者到药品保健科，填写“皮肤科药品保健表”。③药剂师根据患者情况填写“皮肤科药品保健表”，进行药品保健服务。④“皮肤科药品保健表”1式2份，1份交予患者，1份由药品保健科保存备查。⑤药剂师在用药1周后电话回访患者，询问用药情况、了解疾病进展及是否有不良反应，并提出合理建议。
4 讨论
　　有相当数量的皮肤病较严重患者、或全身性皮肤病患者由于经济原因或怕影响声誉，不愿意住院治疗，为这些人提供药学服务相当重要。皮肤病如果用药正确，大多2周痊愈，第1周为关键期，药剂师在用药1周后电话回访患者，有利于帮助患者判断用药正确与否、是否需要换药。据调查，现在许多医院都设立了药物咨询窗口，但它只能被动地服务那些自己有咨询要求的患者。本文所提出的方法不但能减少药源性疾病的发生，减少医疗纠纷，提高病人对医生和药剂师的信任感，而且间接地对提高医生的用药水平有很大帮助。
[参考文献]：
[1] 朱鸽昀.互联网医药学资源搜索引擎[J].药物不良反应杂志,2002,4(3):187.
[2] 徐燕侠,齐晓莲,陈莲珍,等.审查口服药疗单,参与临床合理用药[J].中国医院药学杂志,2002,22(5):310.
[3] 赵自刚.我院开展医院药学服务的体会[J].中国医院药学杂志,1999,34(9):638.
[4] 余自成,邵云弟.老年人的药学监护[J].中国医院药学杂志,2002,22(7):436.

　　〔摘要〕 目的 检测复发性生殖器疱疹 ( RGH ) 患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞在疱疹发作期及静止期的动态变化，并探讨其意义。 方法 采用免疫荧光三标记流式细胞仪检测18例复发性生殖器疱疹患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞，并以18例正常人作为对照。 结果 RGH患者外周血T细胞亚群中的CD3+和CD4+百分数在发作期、静止期差异有显著性( p < 0.05)，两者较对照组均明显下降，其差异有统计学意义( p < 0.05)。 RGH外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数在发作时较对照组明显下降 ( p < 0.01 )。而在静止期明显升高。 结论 RGH患者疱疹发作时外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数明显降低，上调机体抗病毒T细胞免疫应答反应；而在静止期外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数增多，下调机体抗病毒免疫反应，这可能是疱疹病毒长期在体内存在，反复发作的重要原因之一。
〔关键词〕生殖器疱疹 CD4+CD25+调节性T细胞 动态变化

　　生殖器疱疹的反复发作可能与患者淋巴T细胞功能异常有关(1)。为探讨CD4+CD25+调节性T细胞在复发性生殖器疱疹（recurrent genital herpes，RGH）发病机制中的作用，我们采用免疫荧光三标记流式细胞仪检测18例RGH患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞在发作期及静止期的动态变化，并探讨其意义。
　　一、对象和方法
　　1． 病例组：经临床确诊的18例RGH患者，符合2000年我国卫生部疾病控制司和全国性病麻风病控制中心联合颁布的GH诊断标准，所有患者疱液HSV I+II 抗原检测均为阳性(ELISA方法)。在本组病例中、男16例，女2例；平均年龄26.5岁（22-50岁）平均病程2.8年（2个月至5年），年复发 < 6次者7例，年复发≥6次者11例。静止期为患者在典型的会阴部疱疹愈合后二周以上。
　　2．正常人对照组：18例，其中男16例，女2例，平均年龄28岁（19～45岁）。两组间年龄、性别、经t检验均P > 0.05，差异无显著性，显示两组间具有可比性。
　　二、实验方法
　　1．主要试剂： CD3-PeCy5、CD4-FITC、CD25-PE荧光标记单克隆抗体、同型对照鼠-IgG1，所用荧光标记单克隆抗体为美国Beckman-Coulter公司生产。
　　2．外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测：用EDTA抗凝管静脉取血2ml，标本从采血至制备在6 h内完成，以防细胞死亡。标本编号，共计三管，一管作同型对照管，另二管作检测管。各管加入全血100ul，检测管1加CD3-PeCy5、CD4-FITC及CD25-PE荧光标记单克隆抗体，检测管2加CD3-PeCy5、CD8-FITC各20ul，同型对照管加入相应荧光标记同型对照鼠-IgG1各20ul，混匀后置室温暗处避光孵育15min，然后各管加入500ul Optilyse-C(Beckman-Coulter公司生产)溶血素裂解红血胞，室温暗处避光10min，再加入500ulPBS, 室温暗处避光10min。在Coulter Epics XL流式细胞仪（美国Beckman-Coulter公司）上获取50 000个淋巴细胞，用EXPO-32软件进行分析。
统计学分析：两样本均数比较用t检验；
　　三、结果
　　1．RGH外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数在发作时较对照组明显下降 ( p < 0.01 )。而在静止期即明显升高。图I—II为流式细胞仪显示同一病例发作期、静止期的双参数直方图，图中显示CD4+CD25+调节性T细胞百分数分别为5.09%和10.2%。
　　2．RGH患者外周血T细胞亚群中的CD3+和CD4+百分数在发作期、静止期差异有显著性( p < 0.05)，CD4+在静止期明显升高。CD8+百分数和对照组的差异无显著性( p > 0.05)。详见表I。

表I RGH患者外周血CD4+CD25+T细胞与T细胞亚群检测结果

注：与对照组比较 * p < 0.05，** p < 0.01
　　三、讨论
　　单纯疱疹病毒( HSV )的复制主要局限于受累的上皮细胞和神经系统等靶组织中。其复发性、病程迁延是目前治疗的难题。RGH患者细胞免疫的异常及对病程的影响也得到证实，主要是抑制抗原呈递作用，抑制感染的树突细胞成熟等(2)。
　　我们用流式细胞仪分析18例RGH患者外周血T细胞亚群中的CD3+、CD4+、CD8+和CD4+CD25+表达水平、并与正常人对照组比较，结果常发现病例组不论在发作期或静止期，其CD3+细胞及CD4+细胞较正常对照组均降低，相比差异有显著意义，而CD8+细胞的变化不明显。说明机体受到HSV抗原刺激后，活化及产生了特异性抗疱疹病毒的细胞毒性T细胞，参与了对皮肤疱疹病毒感染的细胞免疫反应。CD4+CD25+在发作时明显降低。
　　CD4+CD25+细胞由Sakaguchi等首先描述(3),是CD4+细胞的一个小的亚型，约10%。CD25+通过细胞毒性T细胞抗原4依赖的细胞间直接接触及产生TGF-β从而产生免疫抑制作用。CD4+CD25+还可影响其它T细胞的功能， 主要是抑制细胞因子产生和分泌、下调共刺激分子和粘附分子的表达、抑制细胞增殖、诱导细胞失能、通过促进细胞凋亡而清除效应细胞(4),，另一方面，CD25+T细胞还可以通过竞争空间调节其它T细胞的分化，并不依赖于特异性或效应子功能(5)。
　　RGH患者疱疹发作时外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数明显降低说明其对其它细胞功能的抑制降低，上调机体抗病毒T-细胞免疫应答反应。患者静止期升高说明存在着细胞免疫抑制，适应性CD4+CD25+表面CD25表达水平取决于疾病的种类以及产生调节作用的部位. CD4+CD25+可能和致病T细胞共同竞争APC而被活化(4),。活化的CD4+CD25+主要通过接触抑制的方式抑制T细胞的活化和增殖。另外，CD4+CD25+还可分泌细胞因子IL-1O和TGF-β抑制免疫反应(6)。本文观察结果显示RGH患者在静止期存在着通过活化CD4+CD25+的细胞免疫抑制。RGH患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分数增多，下调机体抗病毒免疫反应，可能是疱疹病毒长期在体内存在，反复发作的重要原因之一。
〔作者单位：汕头市皮肤医院〕

参考文献
(1) Posavad CM, Wald A, Hosken N, et al. T cell immunity to herpes simplex viruese in seronegative subject; silent infection or acquired immunity? J Immunol,2003,170:4380-4388.
(2) salio M,Cella M, Suter M, et al. Inhibition of dendritic cell maturation by herpes simplex virus. Eur JImmunol, 1999, 29: 3245-3253.
(3) Sakaguchi S,Sakaguchi N,Asano M,et al. Immunologic selftolerance maintained by cell expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases. J Immunol,1995,155(3);1151-1164.
(4) 奚桂林.CD4+CD25+调节性T细胞研究进展。〔J〕国外医学免疫学分册2004,27(3)；141-145。
(5) 许飞，林耀广.调节性T细胞在支气管哮喘中的重要作用。[J] 基础医学与临床 2004,24(4);371-373.
(6) 吴祖群.调节性T细胞研究进展。[J] 现代免疫学 2004,24(1)；77-79.